Tipuri de celule cultivate. linii celulare continue
Unele tipuri de celule diviza in vitro doar de câteva ori, altele pot supraviețui până la o sută de linii de celule; există celule care se pot multiplica la infinit. Aceste diferențe, a căror natură nu este complet clar, să subdivizate celule cultivate în trei tipuri principale.
culturi de celule primare. Celulele tocmai luate de la animal și transferate în cultură, sunt reprezentate de diferite tipuri; cele mai multe dintre aceste celule sunt capabile de o creștere foarte limitată in vitro - aparent pentru a nu mai mult de 5-10 diviziuni. Cu toate acestea, aceste celule pot prolifera multe virusuri, cu toate acestea culturi primare derivate din rinichi de maimuță, rinichi embrionar uman, amniotice umane, embrioni de pui și embrioni de șoarece, acestea sunt utilizate pe scara larga in studiile de laborator și producția de vaccinuri.
tulpini de celule diploide. Acesta este un tip de celule care sunt capabile sa fie supuse in vitro la 100 de diviziuni, menținând în același timp eșec inițial cromozomi diploide (Hayflick, 1965). tulpini diploide de fibroblasti derivate din embrioni umani sunt frecvent utilizate în fabricarea virologie și vaccin diagnostic și sunt, de asemenea, utilizate în studiile experimentale. Trebuie avut în vedere faptul că unele caracteristici ale genomului viral sunt puse în aplicare numai în celulele care păstrează un nivel normal de diferențiere.
linii celulare continue. Acesta este un tip de celulă; care sunt capabile de a se multiplica la infinit in vitro. O astfel de linie „nemuritoare“, de obicei, sunt derivate din tumori sau tulpini celulare diploide transformate. își pierd adesea asemănarea lor cu aceste celule, de la care, ca pentru o cultivare îndelungată numeroase mutații succesive sunt supuse. Cea mai comună indicație pentru aceste modificări este dedifferentiation, t. E. Dispariția caracteristicilor morfologice și biochimice, care celulele posedă in vivo. De exemplu, sub un microscop, este imposibil să se facă distincția între o linie de celule epiteliale de origine ectodermică și eptodermalnogo și linia fibroblastic mezodermala. Celulele transplantat linii adesea aneuploid si pot produce tumori atunci cand transplantat animale.
Linia celulară continuă Hep-2. HeLa și KB Descarcă acum, ceea ce duce de la începutul carcinoamelor umane, mulți susțin reproducerea virusurilor. Aceste linii și linii derivate din celule de țesut de șoarece (L929, RTM) și hamster (BHK-21), sunt utilizate pe scară largă în virologie experimental; In prezent, este cunoscut pentru un număr de linii celulare continue derivate din celule de animale diferite. În American Type Culture Collection sunt stocate în stare congelată, multe linii celulare testate în absența virusurilor exogene și micoplasme.
Marele avantaj al liniilor celulare continue în comparație cu culturile de celule perrichnymi este că acestea pot fi propagate pe termen nelimitat prin transplantarea celulelor la intervale regulate. Mai mult, celulele rămân viabile timp de mai mulți ani, atunci când sunt depozitate la o temperatură scăzută (-70 până la - 196 ° C) sub formă de suspensie în glicerol sau dimetilsulfoxid. Deoarece celulele din Trecerile seriale inevitabil variază în laborator, de obicei, păstrat la o temperatură joasă, cu un număr mare de celule ampule și să le utilizeze ca semințe pentru a produce loturi care îndeplinesc cerințele experimentului.
Unele linii celulare continue au fost adaptate la creștere în cultură în suspensie, așa numită, t. E. O singură suspensie de celule, care a fost agitat în mod constant magnet rotativ. Astfel de culturi sunt deosebit de utile în studiul biochimic al multiplicarea virusului și producerea de vaccinuri industriale.
In biologie moleculara, cultura de celule imortalizate este folosit cu mare succes în procesele de studiu macromoleculari. Deseori, culturile în suspensie sunt folosite, dând o populație mare și omogenă de celule care pot fi sincronizate pentru a infecta un virus, iar apoi face rapid probele necesare. Pentru a creste mari cantități de celule capabile să crească numai în monostrat sau virusuri prefera proliferează în culturi monostrat, a folosit pe scară largă „spinner“ culturi în care celulele sunt atașate ca un monostrat pe suprafața interioară a vaselor cilindrice, este rotit încet într-o poziție orizontală.