Cerințe nutritive. La sfârșitul anilor 40 - începutul anilor '50 o mare parte din celule crescute pe plasma sau cheag de fibrinogen în prezența extractelor tisulare.
În lucrarea sa clasică, The Eagle (Eagle) a explorat necesitatea acestor linii celulare in substante nutritive.
El a reușit să realizeze multiplicarea celulelor în mediu definit conținând un amestec de aminoacizi, vitamine, săruri și hidrați de carbon, precum și cantități mici de cai de ser și oameni.
În acest caz, 27 de factori de mediu au fost identificate ca fiind esențiale pentru creșterea economică. Ei au format baza mediului nutritiv, cunoscut sub numele de mediu de bază Eagle (BSI).
Dintre cei 20 de aminoacizi care intră în compoziția, 13 sa dovedit a fi indispensabil, iar restul poate fi sintetizat din alte surse de carbon. Eliminarea oricare dintre cele 7 vitamine au condus la dezvoltarea simptomelor de deficit de vitamina A.
Când cultivarea celulelor în dilatator mediu trebuie să fie actualizate și, prin urmare, acest mediu a fost curând înlocuit cu minim mediu Eagle (MAI), în care concentrația diferitelor substanțe a fost crescută, asigurând astfel creșterea continuă a celulelor în cultură timp de câteva zile fără schimbarea mediului.
Dependența de atașament și creșterea în suspensie. Cele mai multe celule de mamifere se pot dezvolta doar prin a fi atașat la substrat - la alte celule, la colagen, la sticlă sau plastic.
Atașarea celulelor la substrat substratul este foarte popular în studiul modelelor de creștere celulară în funcție de atașare la substratul este gelatina (colagen denaturat).
De obicei, celulele desprinse din substratul pe care cresc sunt incapabile să crească în suspensie și degenera rapid. Pentru a rezolva unele sarcini folosesc celulele atașate pe substrat, este de preferat, dar și în alte scopuri, este mai bine să se utilizeze o suspensie de celule.
S-a arătat că, dacă celulele L din balon rotativ pentru a se menține la o viteză de rotație de 40 rot / min, astfel de celule nu atașați la suprafață și adăugarea culturii metilceluloza la o concentrație de 0,1%, pentru a preveni agregarea celulelor și menține viabilitatea. Eliminarea ionilor bivalenți și o creștere a concentrației de fosfat favorizează creșterea celulelor în suspensie.
Ciclul celular și ciclu de creștere.
Celulele în creștere diviza în mod regulat aproximativ o dată la fiecare 24 de ore.
Celulele animale în cultură în procesul de diviziune
Referindu-se la curba de creștere a celulelor.
Curba de creștere a celulelor în cultură
În absența oricăror celule constrângeri distribuite uniform pe tot parcursul ciclului celular, iar în cazul în care numărul de celule este dublată la intervale regulate de timp, cultura este în faza de creștere exponențială (2). De obicei, după o scurtă perioadă de creștere exponențială a unuia sau a celuilalt factor devine limitativ. Acest lucru poate să apară ca urmare a epuizării oricăror factori de mediu sau ca urmare a faptului că celulele cultivate acoperă complet suprafața pe care cresc. Rata de creștere la aceasta încetinește, iar numărul de celule în cultură de saturație (densitatea celulară finală) ajunge. Când diviziunea celulară suplimentară opri, vine staționare culturi în faza de creștere (3).
Când recuperarea celulelor în cultură factor care limitează revenirea la faza G1 a ciclului celular, sinteza ADN-ului are loc, după care celula se divide. Există mai multe teorii pentru a explica acest tip de control al creșterii, dar ele sunt toate bazate pe presupunerea că controlul este efectuat la un moment dat situat la scurt timp după împărțirea. După terminarea acestei faze a celulei incluse în ciclul celular și divide. Cele mai multe dintre celulele intr-un animal se află sub o formă de control de creștere, ca aceștia să înceteze promovarea ciclului celular, la scurt timp după mitoza. Prin urmare, pentru a stimula cultura primară înainte ca celulele reia mișcarea la faza ciclului de diviziune ar trebui să elimine restricția creșterii. Celulele tumori în creștere pierde o sensibilitate la controlul creșterii și, prin urmare, derivate din celulele tumorale primare sunt ușor de adaptat la creșterea în cultură și poate crește până la densități mai mari comparativ cu celulele din țesuturile normale. Regulament, în funcție de densitatea de cultură (inhibiției de contact). Celulele primare care se divid în cultură, poate suferi inhibiției de contact așa-numitul. În cele mai multe cazuri, realizarea unui monostrat dens însoțită de încetarea diviziunii celulare. Celulele normale poate pentru un timp complet să rămână viabile într-o stare de repaus. Densitatea finală a celulelor depinde de concentrația de ser în mediu și suprafața de atașare. S-a arătat că adăugarea de ser la un culturi inhibat contact induce sinteza ADN-ului și diviziunea celulară se reia.
Următoarele modificări au loc asupra creșterii monostratul de celule:- Celulele devin mai aglomerate și mai puțin aplatizat, reducând astfel proporția suprafeței celulare cu care se confruntă mediul;
- Miercuri nutrițional epuizate și celelalte componente, în special în zona din imediata apropiere a celulelor.
Reluarea diviziunii celulare după monostrat de celule nanesniya rana
Din ser, o parte din mediul de cultură, a fost izolat de mai mulți factori, care posedă capacitatea de a elimina inhibiției de contact. Caracterizat de celulele canceroase de contact de inhibare afectarea
Celulele canceroase continua sa creasca si dupa ce umple întreaga suprafață a substratului, formând un multistrat.
Micrografie (SEM) a liniilor de celule A431: carcinom epidermal uman. Săgețile indică locația „superimpozarea“ celule între ele
precum celulele transformate cu viruși.
Celulele transformate in retrovirusuri vitro (Rous sarcoma) care transportă o mutație sensibilă la temperatură într-o oncogena.
Forma rotunjită a celulelor transformate (34 ° C)
Aceste celule dobândesc morfologie normală atunci când produsul oncogen inactivat prin creșterea temperaturii (39 ° C)
Se crede că aceste celule își pierd reglementarea lor dependente de densitate. Celulele transformate în contrast cu netransformat continua să crească până la epuizarea mediului.
Unele anomalii sunt adesea observate în timpul transformării celulelor normale virusuri oncogenice cultivate:
1. Anomaliile asociate cu modificări ale membranei plasmatice:
- Consolidarea transportului metaboliților;
- Consolidarea formarea de bule la membrana plasmatică.
2. Anomaliile Atașament:
- Scăderea în aderență la suprafețe dure, ca o consecință - de economisire formă rotundă;
- Inabilitatea de a filamente Actin pentru a forma grinzi mari. Cultura celulară și adeziune.
Un rol de lider în recunoaștere celulă-celulă și de adeziune celulară glicoproteine suprafața de joc a membranei celulare.
Principala glicoproteina de suprafață celulară este fibronectina.
Această proteină este de asemenea cunoscut sub numele de:
cig (rece insolubil globulin- globulină insolubile rece în) și
CSP (proteină de suprafață celulară - proteină de suprafață celulară)
o (proteină de suprafață de legare - suprafața de legare a proteinelor) 2-SB
LETS proteină (,, transformare sensibil mare extern - mare, proteine de exterior transformatoare sensibil).
Fibronectina are o greutate moleculară de 220.000, dar poate fi, de asemenea, sub formă de dimeri și oligomeri superiori legați prin legături disulfidice;
Structura dimerului Fibronectina:
Site-uri cu caracter obligatoriu:
1 - colagen
2 - celula
3 - heparină.
Această proteină se găsește în ser și pe suprafața celulelor normale.
Fibronectina este absent de pe suprafața celulelor mitotice și crește cantitatea brusc când ajunge la un monostrat complet de celule normale sau pentru a opri proliferarea celulară la concentrații mici de ser.
Adaugarea de fibronectinei la celulele transformate rezultatele într-o normalizare parțială a fenotipului celular, având ca rezultat creșterea adeziunea celulelor între ele și la substrat.
Aparent, fibronectina este unul dintre factorii serici care facilitează atașarea celulelor și răspândirea pe suprafața vaselor de cultură.
Fibronectina nu se poate face referire la proteinele membranare integrate, deoarece acesta poate fi îndepărtat de pe suprafața celulară atunci când celulele au fost tratate cu 1 M uree și concentrații scăzute de tripsină.
molecula Fibronectina sunt destul de flexibile și sunt compuse din mai multe domenii de vag legate. Pe formele fibronectina de suprafață celulară o rețea fibrilară relativ staționară conectată prin membrana celulară, elementele citoscheletului.
adeziune intercelulară are loc în trei etape:
1) conectarea inițială a celulelor, care nu necesită energie.
2) după 2 minute la 37 ° C între celulele liant, format dezintegreze 0,01% tripsină. Această legătură este formată numai între celule, dar nu între celule și substrat.
3) după 8 minute la 37 ° C a produs o comunicare mai stabile. Linii celulare. Linia celulară - cultură omogenă de celule derivate mai des din aceleași perechi de celule părinte, și având proprietăți definite și relativ constante și caracteristici.
Liniile de celule limitate trăiesc opredelonnoo număr de pasaje, și apoi cultura moare.
linie celulară limitată poate fi, de asemenea, „transformat“ și transforma într-o linie celulară permanentă.
Nu este clar, exista celule stem in cultura trecerii constante sau ele preexistă într-o formă deghizată în linia restricționată a populației de celule.
Puteți sugera, de asemenea natura mutației apariției lor (rearanjamente cromozomiale, traslokatsii, nesparivanie parțială sau completă sau mutații punctiforme).
Degenerării celulelor caracterizate prin următoarele caracteristici:- modificări morfologice (melchanie sau extindere, reducerea adezivității, creșterea miezului);
- scurtarea ciclului celular (timpul de dublare scade până la 12 ore, de obicei 36 - 48);
- Funcția celulelor din ser adăugată în scădere;
- nesolicitant la calitatea substratului;
- creșterea potenta in formarea de tumori.