6. Prepararea felii;
8. În cele din urmă secțiuni.
Scurtă descriere a etapelor:
1. Material Capture.
Pentru examenul histologic ia bucăți de organe și țesuturi de cel mai mult de 1 cc. Materialul este de dorit să se obțină cât mai curând posibil după moartea oamenilor (metoda de studiu al materialului cadavru uman - Autopsy).
În scopuri de diagnosticare a materialului pentru examinare histologică poate urca la om, in vivo, folosind instrumente speciale sau în timpul intervenției chirurgicale. Această metodă de producere a materialului se numește o biopsie.
Luate pentru materialul de examinare histologică imediat să fie supus la fixare. Fixation - Metoda de prelucrare tisulară, în vederea consolidării duratei sale de viață structură. Acest lucru se realizează prin supunerea tesatura soluții speciale (fixativii). Cea mai importantă schimbare care apare în țesutul sub influența opritorului este coagulare (coagulare) proteine. Valoarea de fixare ar trebui să ia 20-100 de ori mai mare decât volumul de o bucată de material fixat.
Există file simple și complexe. Prin simpla includ 10-20% soluție de formaldehidă, 96 ° alcool 100 (alcool absolut), soluție de acid osmic 1-2% etc. zăvoare complicate: alcool - formol (alcool 70º - 100 ml și 5,2 ml de formol ... ) fluid (coroziv sublimat Zenker - 5 g sulfat de sodiu - 1 g potasiu dvuhromovokioly - 2,5 g apă distilată - 100 ml acid acetic glacial, 5 ml) și fixarea etc. Durată -... de la câteva ore până la 1 zi sau mai mult în funcție de natura și proprietățile de prindere a materialului.
3.Pomyvka în apă.
După fixare, materialul este spălat (de obicei, mai multe ore în apă curentă), pentru a se elimina excesul de precipitare a diferitelor lichide de reținere și reținere.
Pentru a studia la microscop de astfel de piese nu pot fi corpuri fixe, astfel cum ele nu sunt transparente. Pentru bucata corp ar putea mikroskopirovat, ar trebui să fie tăiate în plăci foarte subțiri - secțiuni, grosimea se măsoară în microni. Aceste secțiuni au fost preparate utilizând un dispozitiv special - microtoame. Dar, în scopul de a tăia o bucată de material de pe microtom, acesta trebuie să fie pre-sigilate. Acest lucru se realizează prin impregnarea lichide solidifică - parafină topită. ceară de parafină nu este solubil în apă și, prin urmare, țesăturile spălate după fixare piesă trebuie să fie mai întâi deshidratată, și numai apoi impregnat.
Deshidratare tesatura gradual (pentru a evita sa produs ridare) ținându-l prin creșterea alcoolilor cetate: 50º, 60º, 70º, 80º, 90º, 96º, 100º. Fiecare felii de alcool sunt de la câteva ore până la o zi, în funcție de mărimea pieselor.
Când piesele de umplere pre-impregnate acele lichide care sunt solvenți pentru parafină (xilen sau toluen). Completați parafină. Când turnarea parafină în bucăți de alcool absolut
transferat într-un amestec de etanol absolut și cloroform, sau xilen, luate în proporții egale, xilen, apoi pur și, în final, în ceară topită o soluție de cloroform saturată, în cazul în care acestea sunt într-un incubator la o temperatură de 37 ° până la 1 zi sau mai mult. În plus umbrire este realizată într-un termostat la 54º -56º în trei porțiuni de parafină.
finală de umplere se efectuează cu adaos de ceară de parafină, care se toarnă în cutii speciale realizate din plăci de hârtie sau de sticlă, iar apoi aceste cutii sau căni după apariția pe parafina suprafață de film scufundat în apă.
Există o întărire completă a parafinei. Felii cu parafina înconjurătoare este îndepărtată din cutii și folosind pasta de parafină topită pe blocuri de lemn sunt obținute blocuri de parafină.
Ștampilele pot fi, de asemenea, făcute corp prin congelare piese (biopsii de urgență).
6. Prepararea felii.
Secțiunile sunt produse cu blocuri de pe un microtom. Cele mai frecvente microtoame cu sania și congelare. În dispozitive speciale microtomul prinse bloc de parafină și cuțit microtom. Există un mecanism care ridică obektoderzhatel cu blocul de un număr predeterminat de micrometri. Aceasta permite, pentru fiecare lamă de alunecare paralelă cu suprafața plană a blocului care primesc secțiuni cu o grosime de 5-10 microni blocuri de parafină.
Personalizat secțiuni microtomice au fost colorate. Înainte de colorarea secțiunilor de parafină îndepărtate cu grijă parafină (dizolvată în xilen).
Colorare ar trebui să fie efectuate în scopul de a identifica în mod clar structura fină a microscopică obiectului. Secțiunile necolorate de cele mai multe structuri sunt la fel de refractă lumina, astfel încât acestea nu pot fi luate în considerare.
Identificarea asupra structurilor histologice tăiate în funcție de relația lor cu inegală colorant. Unele structuri cutoff reacționează cu coloranți acizi, iar acestea sunt colorate (acidofile, structura oxyphilous) reacționează cu alți coloranți de bază și colorate predominant din (structuri bazofile). Unele structuri sunt vopsele colorate și acide și bazice.
Prin origine distinge culori naturale, care includ vopsele de plante și animale, și coloranți artificiali. Vopseaua este planta hematoxilină, care este extras din logwood, în creștere în America și Armenia. Prin cerneluri animale se referă carmin, care este extras din insecte cochineal vii pe copaci Cactaceae în Mexic, RA et al. In prezent, cele mai multe vopsele preparate sintetic (coloranți artificiali).
Colorarea specifică a structurilor histologice distinge colorant nuclear (nuclei de colorare), citoplasmatică (colorarea citoplasmei) și speciale, colorarea selectiv o anumită structură.
vopsea nucleară - hematoxilină, carmin, safranina, albastru de metilen, azur, tionina. Vopsele citoplasmatice - eozină, picrofucsin.
Există coloranți speciali și reactivi: sudan III (petele de grăsime într-o culoare portocalie), acid osmic (impregniruemy ea grăsime okrashivatsya negru) rezortsinfuksin Weigert (dă o culoare închisă fibre elastice de culoare albastru) orsein (fibre elastice pete de culoare brună). Metilen albastreala elementele nervoase în albastru și argintiu de impregnare, atunci când a lua maro.
In majoritatea cazurilor, colorația pentru secțiuni histologice de soluție de colorare cu hematoxilină utilizate (preparat prin metoda Boehmer) și 1-2% eozină.
8. secțiunea Concluzie.
Pictat în apă și se spală felii pentru a evita ceata deshidratate în alcooli (70º, 96º), ilumina o carbol-xilen, xilen și apoi o lamă de sticlă, în care secțiunea este plasată o picătură de balsam și acoperit cu o felie coverslip. Balsamului este o rășină dizolvată în xilen a unei specii de pin, în creștere în Canada (Canada balsamic), rășină de brad (balsam Siberian) sau mediu sintetic special.
In cadrul studiului pentru a clarifica laboratoarele diagnostice histologice de biopsie au recurs la procesarea accelerată a materialului. Bucăți de țesuturi și organe, în același timp, prin aceleași etape de prelucrare, dar timp de 5-7 zile. Uneori, biopsii de urgență a produs așa-numitele atunci când în termen de 15-80 min. captures materiale secțiuni obținute au fost colorate și încheierea lor. Produce fixare rapidă în 10% formalină, flacăra arzătorului sau încălzit cu ajutorul unui cuptor cu microunde. Seals atinge congelare (cloretil, dioxid de carbon sau folosind un microtom de congelare).
Exemple de agenți de colorare hematoxilina diagrama - eozină
1. secțiuni de parafină sau congelate au fost aduse în apă.
2. Hematoxylin - timp de 3-5 minute.
3. Se clătește cu apă - 2 minute.
4. Diferențierea în alcool, se acidulează cu acid clorhidric (soluție de acid clorhidric 1%, în alcool 70%), câteva secunde, urmată de reducerea cu apă alcalină (aproximativ 1 minut). Acest pas este de dorit, dar nu este necesar.
5. Clătirea în apă curgătoare.
6. Clătirea cu apă distilată.
7. Acoperire 1% eozină - 1-2 minute.
8. Clătirea cu apă distilată.
9. Deshidratarea în alcool - 2min.
10. Awakening în xilen - 2 min
11. Încheierea tăiat - o picătură de balsam, sticla de acoperire.