Se numește aglutinare aglutinare a bacteriilor prin interacțiunea cu specificul lor AT. Pentru a efectua RA necesită trei componente: 1) AG (aglutinogen); 2) AT (aglutinina); 3) o soluție de electrolit (o soluție izotonică de clorură de sodiu). Reacția de aglutinare participă numai antigene corpusculare (bacterii, eritrocite, particule de latex încărcate cu antigen).
testul de aglutinare pe sticlă. Pe obiectiv smântânit picătură de pipetă stivă lo aplicat seruri de diagnostic (diluție de ser 1:10 până - 1:20). bucla bacteriologice ia cultura pură a microorganismului testat cu suprafața înclinată a fost transferată într-o picătură de ser și se amestecă. Reacțiile rezultate reprezintă ochiul liber după 3-5 minute. Atunci când un răspuns pozitiv la scăderea serica nota apariția fulgilor (mari sau mici), vizibile în mod clar pe fond întunecat cu balansoar diapozitiv. În cazul lichidului de reacție negativă TION este uniform turbiditate.
testul aglutinarea în tuburi. Numărul de tuburi este format din 1 ml de soluție salină. In tubul primul test se adaugă un volum egal de ser investigat. Se prepară în serie de două diluții ale serului (titrare ser) și apoi introdus în fiecare tub 2 picături de suspensie de bacterii inactivate (diagnosticum). Tuburile au fost plasate timp de 2 ore într-un termostat la 37 ° C Reacția are loc cu formarea de fulgi mici, care sunt invizibile cu ochiul liber, astfel încât înregistrările rezultatelor se efectuează la o ușoară creștere într-un dispozitiv special - seroscopy. Intensitatea de aglutinare în considerare în conformitate cu „patru plus“: aglutinarea completă - 4+ aglutinare parțială - 3+ sau 2+, rezultat îndoielnic - +. Pentru titrul de anticorpi din serul de testare ia ultimei diluții în care aglutinare 2+.
reacția aglutinarea în eprubete (reacția de aglutinare nepliată) a fost realizată pentru a determina titrul de anticorpi la agenți patogeni (reacție Widal) tifoide paratifoidă, bruceloza (reacția Wright), tifos (reacția Weigl).
Aglutinarea (lat agglutinatio -. Gluing) - lipire (conexiune) antigennesuschih particule corpusculare molecule de anticorpi specifici în prezența electroliților, care se termină formă vizibilă cu ochiul liber sau nămol flocoanele (aglutineze) (celule întregi, particule de latex și altele.). Natura precipitatului depinde de natura antigenului: bacteriile flagelat da krupnohlopevidny precipitat bezzhgutikovye și beskapsulnye - fine, capsula - tyazhisty. Distinge aglutinare directă, în care, în combinație cu anticorpi specifici implicați direct antigene proprii ale celulelor bacteriene sau de alt tip, de exemplu eritrocite; și indirect sau pasiv, în care-LARG a celulelor sau a eritrocitelor bacteriene sau particule de latex sunt purtători nu dețin, și sorbent baie de ele antigene străine (sau anticorpi) pentru detectarea anticorpilor specifici acestora (sau antigeni). Reacția de aglutinare implicată în principal anticorpi care aparțin IgG și IgM de clasă. Are loc în două etape: în primul rând, există o interacțiune specifică a centrului activ al anticorpului cu antigenul determinant, această etapă poate avea loc în absența electroliți și nu este însoțită de schimbări vizibile în sistemul reacționează. Pentru a doua etapă - educativ-TION aglutinează - trebuie să aibă electroliți care reduc sarcina electrică a anticorpului complex-Lex antigen + și să accelereze procesul de lipire. Această fază se termină sub formă-em aglutina.
Trebuie înțeles că prin amestecarea soluțiilor de antigeni omoloage și anticorpii nu sunt întotdeauna manifestări vizibile aglutinare observate. Precipitatul format numai în anumite raporturi optime ale ambelor componente de reacție. În afara acestor limite, cu un mare exces de antigen sau anticorp de răspuns este observată. Acest fenomen este denumit „fenomen prozonă“. Se observă ca în reacția de aglutinare, și atunci când reacția de precipitare. Apariție prozonă în reacțiile imune deoarece antigenele implicate în acestea, sunt în general polideterminantnymi și moleculele de anticorpi IgG au doi centri activi. Cu un exces de suprafață anticorpi fiecărei particule acoperite cu antigen de molecule de anticorp, astfel încât nu există grupuri determinante libere, astfel încât al doilea anticorp centrul activ nelegat nu pot reacționa cu diferite particule antigenice și le asociază unele cu altele. Formarea precipitatului vizibil sau aglutineze suprimat ca în exces de antigen atunci când nu există nici un centru activ liber al anticorpului și, prin urmare, complexele antigen + anticorp + antigen nu mai poate înaspri.
Variante ale reacțiilor de aglutinare accelerate. Reacția de hemaglutinare pasivă și variantele sale
reacția de aglutinare clasică implică utilizarea de antigeni corpusculare. Cu toate acestea, antigene solubile pot fi implicați în ea. Pentru a face posibil acest lucru, astfel de antigeni adsorbiți pe un particule inerte imunologic. Ca purtător poate cuvă utilizează particule de latex sau bentonită, dar în prezent cel mai frecvent utilizate, ai eritrocitele de animale sau oameni, îmbunătățirea proprietăților lor adsorbanți de tratament soluție de tanin, formol sau benzidina. Globulele rosii sunt adsorbite pe antigen în sine, numit sensibilizi-ment antigenul și răspunsul imun în care sunt implicați - hemoaglutinare indirectă sau pasiv (Phragmites, sau PHA), din moment ce celulele roșii din sânge sunt implicate în ea pasiv.
TPHA pus în plăci de polistiren speciale cu lune, având un fund emisferică. Când se utilizează pentru diagnosticul serologic în prepararea acestor semilună-TION Diluați de două ori în soluție salină testată, și apoi se adaugă la acesta ca suspensie eritrocite Kuma-sensibilizat diagnostic. Interpretarea rezultatelor se realizează după 2 ore de incubare la 37 ° C pentru sistemul chetyrehkrestnoy. Atunci când un răspuns pozitiv la aglutina celule roșii din sânge se depun pe fundul semicercului și acoperit uniform cu ea sub forma unei umbrele inversata. Atunci cand celulele roșii din sânge sunt, de asemenea, reacții negative pentru a soluționa, lichidul devine transparent, iar precipitatul apare ca un mic „disc“, în centrul semicercului. titru seric în PHA considerat ultimul ei de diluție, care dă în continuare un hemaglutinarii distinct, fără dovezi semnificative ale unui „disc.“
PHA poate fi de asemenea utilizată ca metodă rapidă pentru diagnosticarea bacteriologice pentru detectarea direct în materialul de bacterii necunoscute, virusuri, toksi-nou, de exemplu, porcine patogeni stafilococi coagulazo și altele. În acest exemplu de realizare, post-Novki TPHA ca component de reacție cunoscute utilizate eritrocite adsorbit nye bine-cunoscut pentru anticorpul său specificitate - kit de diagnostic anticorp eritrocit. Dacă materialul de testat conține o cantitate suficientă de antigen cunoscut TPHA este pozitiv.
Materializări utilizare TPHA sunt: reacție antigen neutralizare (RNAg) neutralizare răspuns cu anticorpi (phat), reacția de inhibare a hemaglutininei pasivă (RTPGA). Pentru aceste reacții folosesc antigenice și anticorpi diagnosticum eritrocitar. Este posibil să se utilizeze simultan două reacții unidirecțională reciproc de control cu TPHA exemplu diagnosticum antigen-NYM și RNAg cu diagnosticum anticorp eritrocit.
Reaction anticorpi de neutralizare (phat) constă în aceea că o suspensie ce conține antigenul dorit sunt amestecați cu anticorpi specifici în ser conținând imune cunoscut în cantitățile funingine-corespun- și se incubează la 37 ° C timp de două ore. După aceea, antigenul eritrocitar kit de diagnosticare. Amestecul a fost agitat și lăsat la temperatura camerei. Rezultatele permit timp de 3-4 ore, și în final -. 1824 ore dacă în materialul există un antigen, se va lega anticorpi (a le neutraliza) și, prin urmare, nu se întâmplă hemaglutinare.
Același principiu se pune antigen neutralizare reacție (RNAg). Numai în acest caz, în materialul detecta anticorpi. antigen specific adăugat la un astfel de material de test se va lega la anticorpii conținute în acesta, adică. E. Se produce anticorpi antigen de neutralizare și, prin urmare, adăugarea de hemaglutinare anticorp-Erith rotsitarnogo diagnosticum nu apar.
koagglyutinatsii reacție. Este un exemplu de realizare pasiv, adică. E. Rulou standuri mediate kami purtători de accelerare de reacție de aglutinare anticorp pe sticlă. Baza acestei reacții de polo Amânat proprietate unică de Staphylococcus aureus, care are ca parte a proteinei A peretelui celular pentru a se lega la Fc fragmente de IgG și IgM. Anticorpii Centrii activi rămân liberi și pot interacționa cu determinanții antigen specifice. Pe picătură de sticlă-ing subiect se aplică la o suspensie de 2% din stafilococii acoperite cu anticorpi corespunzători și a adăugat o picătură de suspensie de bacterii de test. În conformitate cu antigen anticorpi în 30-60 apare clar anticorpul aglutinare stafilococi încărcat.
Reacția de aglutinare latex (LAS). purtătoare de anticorpi în acest sistem de diagnosticare sunt mici particule standard de latex. reacția micrometodă este efectuată în godeurile de pe sticlă. Condiția de bază pentru o formulare cu succes a HAP este respectarea strictă a raporturilor cantitative ale componentelor sistemului: 50 pl din materialul de testat s-a adăugat 10 pl de anticorpi sensibilizate de preparare latex. Specificitatea PAH a fost monitorizată cu ajutorul testului cu trei pini „roll conținut în sistemele de testare comerciale: reacție clar pozitivă și reacție negativă cunoscută calitate suspensie de control latex sensibilizat cu PAH NYM (nu anticorpi care transportă) latexuri cu material de testat. În țara noastră, în calitate de anticorpi uzura lei specifice folosind Latexurile polistiren monodisperși cu diametre diferite ale particulelor, ramie (0,3; 0,66; 0,75; 0,8 um). HAP este utilizat pentru detectarea rapidă a microorganismelor sau a antigenelor lor în materialul de testat.
detecție imunomagnetică de antigeni. O realizare a reacției accelerate agglyuti-națiune pe sticla se referă la utilizarea particulelor supermagnetic polimerice acoperite cu anticorpi specifici mi. O astfel de particulă se leagă la 107- 108 celule ale microorganismelor, prin sensibilitatea acestei metode este de 5 UFC / ml. detectare imunomagnetică mikroorganiz-mov poate fi utilizat în combinație cu PCR.
Reaction agregat-hemaglutinarea (raga). Acesta vă permite să detecteze rapid în sângele pacienților ca un antigen circulant liber (antigenemia) și antigene asociate cu anticorpi - complexe imune circulante (CIC). Ragan utilizat pentru celulele roșii din sânge sensibilizate anticorpi adecvate Nye. Adăugarea de serul sanguin al pacientului, care conține antigene de eritrocite sensibilizate, pe care sunt fixate anticorpi duce la încleiere-vaniyu (aglutinare) eritrocitelor și complexe imune.
Coombs antiglobulină (Coombs reacție R.). Prin intermediul reacției directe și aglutinare pasivă determinată complet de anticorpi (bivalent). (monovalente, blocarea) anticorpi incomplete nu sunt detectate prin aceste metode, deoarece conectarea la antigen, blocând-o, dar nu se poate determina agregarea antigenului în marile conglomerate. Incomplete (blocare) anticorpi de apel în care operează un singur situs activ; al doilea centru activ pentru un motiv necunoscut nu funcționează. Pentru detectarea anticorpilor incomplete folosind reacția speciale Coombs (Fig. 72). Reacția implicat: serul pacientului, în care determinarea anticorpilor incomplet corpuscular ser antiglobulină antigen diagnosticum conținând globulină anti-uman. Reacția are loc în două etape:
interacțiunea antigenului cu anticorpi incomplet. manifestări vizibile este acolo. Prima etapă de spălare completă a reziduurilor de antigen din ser de pacient.
ser Interacțiunea antiglobulină obținut prin imunizarea unui animal cu globulină umană, anticorpii cu adsorbit incomplet pe antigen. Datorită faptului că anticorpii anti-globulină bivalent, aceștia se leagă două complexe anticorp monovalent separat AH + anticorp incomplet, ceea ce le face să se lipesc între ele și la apariția de precipitat vizibil.
Chiar și lucrează în biologie