linie celulară permanentă pentru viruși în creștere. Cultivarea continuă a virusurilor.
Permanent celula de linie (continuă) - o celulă capabilă de sub-cultivate in afara corpului pentru un număr nelimitat de treceri. este imposibil să se determine momentul în care cultura devine stabilă la nivelul de cunoștințe despre comportamentul culturilor de celule, adică. e. dobândește capacitatea de a crește pe termen nelimitat. Numai pe baza experienței cu celule fibroblaste umane, sa demonstrat că cultura ar trebui să fie subcultivate de cel puțin 70 de ori, la intervale de aproximativ trei zile înainte de a putea fi considerată constantă linie celulară (continuă).
Toate culturile cu capacitatea nelimitată de a reproduce ( „cultura nemuritoare“) ar trebui să fie numit linii permanente (continue) sau stabile. In virologie literatura este larg răspândită, termenul de „linie continuă de celule“, care se referă la o linie de celule capabile de creștere infinită în afara corpului.
Sub transformare celulară implică modificări genetice ireversibile. caracterizată prin modificarea caracteristicilor de creștere a celulelor cultivate. Transformarea face ca celulele nemuritoare, și mai puțin dependentă de factorii de creștere de nutrienți și a parametrilor geometrici. Modificări în proprietăți de creștere asociată cu o schimbare în transportul de substanțe nutritive prin membrana celulelor si este una dintre caracteristicile adaptive care permit celulelor să prolifereze în condiții nefavorabile pentru celulele netransformate parentale.
Schimbarea este însoțită de o pierdere a proteinei membranei celulare de suprafață (150 kDa) și variația proprietăților antigenice. Principalul avantaj al celulelor transformate - capacitatea de reproducere infinită și proprietăți de creștere îmbunătățite. Celulele transformate pot forma tumori într-un animale imunologic tolerant. Din acest motiv, transformarea este uneori echivala în mod greșit la malignitate. culturi de celule primare, linia diploide și celulele transformate sunt utilizate pe scară largă în practica virologie și au stat la baza creării unor sisteme de culturi celulare la scară largă și producția de vaccinuri.
Aceasta, la rândul său, necesară îmbunătățirea metodelor de cultivare. organizarea de medii si echipamente merchandising pentru cultura de celule.
Obținerea de linii permanente vor spori foarte mult de cercetare în domeniul biologiei celulare si virusologie. a existat o posibilitate de a obține linii de celule mutante și hibride, care a deschis perspectiva creării de noi substraturi adecvate pentru cultivarea virusurilor pe baza lor. Celulele normale ale organismului este subcultivat gestiona un număr limitat de pasaje și apoi proliferarea lor încetează și ei, de obicei, mor. Acest lucru apare, de obicei, după aproximativ 50 de generații, dacă celulele sunt derivate din țesuturi ale organismului adult.
Numai uneori, ei sunt capabili să continue să se multiplice în cultură pe termen nelimitat, devenind un asa-numitele linii de celule constant transformate. Transformarea celulelor în cultură este natura polietiologichesky. Transformarea spontană a culturilor de celule ale țesuturilor normale - un eveniment relativ rar. Frecvența acestor transformări poate fi crescută prin tratarea celulelor cu mutageni sau prin anumite virusuri.
Toate liniile celulare permanente. spre deosebire de culturile de celule normale, cu o durată de viață limitată, sunt transformate, t. e. modificată în mai multe motive, dintre care cel mai important este „nemurirea“. Capacitatea de a se multiplica la infinit în cultura lung, de obicei, asociat cu cariotipuri aneuploid. Unele linii de celule (de exemplu, fibroblaste hamster - BHK-21), deși ele au cel mai bun diploidia de cromozomi, dar cariotip lor, se pare că sa schimbat. Alte criterii de transformare (carcinogenicitate, contactul inhibitie cerințele de mediu) se manifestă în linii diferite în mod diferit.
Toate acestea sunt derivate din transformarea spontană sau indusă de celule din organism sau în cultură. Multe tumori sunt derivate de la animale, deși nu întotdeauna linii celulare formate prin explantation celulelor tumorale in vitro. Liniile de celule derivate direct din țesutul tumoral (adică, transformată în organism), păstrează adesea funcții specializate, cum ar fi capacitatea de a produce unele enzime pentru o perioadă mai mare decât celulele transformate în cultură prin diverse metode (fizice, chimice, agenți virali ). Frecvența liniilor regulate variază în diferite specii de mamifere.
celule de șoarece sunt supuse transformării spontane mult mai frecvent decât celulele umane sau alte mamifere. Aceste diferente par a fi legate de stabilitatea inegală a cariotipul diferitelor specii de animale.
subcultură de celule. și apoi formarea unei linii celulare permanente, au fost mai mult succes atunci când cultura monostrat primar a fost preparat prin inocularea țesut tocat mecanic decât dintr-o suspensie de celule tripsinizate. Poate că acest lucru se datorează unei scăderi a cantității de proteină în structurile de suprafață ale celulelor ca urmare a tratamentului cu tripsină. Pentru transformarea celulelor folosesc adesea viruși. Celulele nou-nascuti de rinichi de hamster (BHK), de exemplu, sunt ușor transformate celule virus sau un virus polyoma SV-40 și embrion de hamster - tip herpesvirus 3 cai. În acest ultim caz, liniile de celule exprimă proteinele specifice virusurilor, dar nu a produs descendenți viral.
Cultura Transfecția celulelor embrionare renale umane virus oncogen SV-40 a crescut in sezonul de reproducere in vitro cu 15-20 la 70-90 dintru generatii. Dintr-o populație de celule capabile de a distinge două linii permanente, aproape fără semne de transformare. Transfecția hepatocitelor șobolanilor normali virus ADN SV-40, o serie de linii celulare SV-40 hepatocite. Utilizarea recombinant vector SV-40 adenovirus obținut diferă prin proprietățile liniilor permanente ale celulelor stromale de măduvă osoasă umană care exprimă antigenul T mare de virus SV-40. tulpina virusului T reticuloendoteliozei a indus transformarea pui culturi de celule hepatice, splina, măduva osoasă și embrioni timus de pui și puii de găină. Marea majoritate a liniilor celulare transformate secreta virusul care provoaca reticuloendoteliozei letale de la pui de 1-2 zile a.
site-uri de integrare a genomului viral preferate au fost site-uri fragile in genomul de mamifere, care este cauzata, se pare, prin caracteristicile lor structurale și funcționale. Rezultatul interacțiunii genoame virale și celulare pot fi achiziționarea anomaliilor cromozomiale și a capacității de celule de reproducere nelimitată.
Liniile de celule de cultură prelungită poate modifica anumite proprietăți, astfel încât să se mențină celulele proprietățile inițiale rasplodki, acestea sunt depozitate la temperaturi scăzute și sunt luate periodic pentru propagarea și utilizarea practică. De exemplu, în multe cicluri celulare de cultivare BHK-21 culturi monostrat pot varia considerabil proprietățile lor originale. Normal de creștere uniformă fibroblastopodob-TION de celule pot fi înlocuite prin creșterea celulelor formatoare de epiteliale și straturi de cluster. Proprietățile de ser depind, de asemenea, rata de creștere a celulelor și sensibilitatea la diferite tipuri si tulpini ale virusului febrei aftoase.
Cele mai multe dintre aceste modificări sunt caracteristice ale altor linii celulare transformate.