Oras Spitalul Clinic №23, București
clasificare
Un important de diagnosticare a bacteriilor este capacitatea lor de a utiliza carbohidrați ca o sursă de energie și de energie în timpul creșterii in vitro. Substratul de bază este glucoza, care este descompus de bacterii în procesul de fermentare (descompunerea carbohidraților în condiții anaerobe) sau respirație (oxidarea substraturilor organice la CO 2 și H 2 O). Bacteriile sunt în imposibilitatea de a efectua procesul de fermentare, sunt așa-numitele bacterii non-fermentează (NSE). Acest grup include microorganisme gram-negative ale familiilor diferite și genuri Unii reprezentanți ai bacteriilor corineforme Gram-pozitive din grupul așa-numitelor difteroizi (Brevibacterium, Turicella), de asemenea, nu a scindează glucoza, dar ele nu fac parte din NSE. (Tabelul 1)..
morfologie
NSE au forma unor tije de mici și mijlocii (trecând în coccidiostatice) dimensiuni, dimensiunea celulei poate fi variată în funcție de compoziția de creștere medie și nutrienți fazele populației microbiene; nu se colorează prin Gram, dar unii reprezentanți (Moraxella spp.) au o rezistență la alcool decolorare a crescut. Nu forma spori, multe dintre acestea au o capsulă. bacterii Partea a mobilității datorită flageli polar sau peritrichous aranjate, la unele specii fixe (Acinetobacter spp.), descris așa numita mișcarea convulsie care crește odată cu creșterea pH-ului la 9,0.
proprietăți culturale
Pseudomonas puțin capricioasă la factorii de creștere. Alcaligenes, Acinetobacter; Alte NSE necesita compozitie complexa de medii nutritive, de multe ori cu adaos de hemină și serul sângelui uman sau animal. Pe agar cu sânge formează colonii netede sau rugoase cu un diametru de 0,2 până la 3 mm, caracterizată prin consistență, pigmentare, prezența sau absența zonei hemoliză în jurul coloniilor de pe agar cu sânge. Cu rare excepții (unele specii de Pseudomonas) nu crește la 42 ° C timp de mulți membri temperatura optimă de creștere este de 30-33 ° C Cele mai multe NSE se referă la aerobi stricte. Unele specii de Pseudomonas capabile de creștere anaerobă în prezența nitrit și nitrat, atunci când acestea sunt utilizate ca acceptori de electroni finali; în care procesul de acumulare de energie chimică începe cu fosforilarea glucozei [31].
Activitatea biochimica slab exprimat, ceea ce face dificilă identificarea. Ele nu formează indol, atsetilmetilkarbinol nu fermentează glucoza si alti carbohidrati. dar multe specii sunt capabile să oxideze zaharuri și alcooli polihidroxilici, fără formarea de gaz. Partea NSE caracterizată prin Inerția completă față de glucoză, altele - glucoza a fost oxidat prin succesive conversia sa la acetil coenzima A, care este inclus în ciclul Krebs asigură metabolismul celulelor microorganismelor aerobe [31]. În acest caz, diferite tipuri de același gen (Pseudomonas spp. Alcaligenes spp. Acinetobacter spp.) Și chiar și tulpinile din aceeași specie (Burkholderia cepacia) pot varia pe activitatea saccarolitic. Activitatea proteolitică este slab exprimat, cu toate acestea, pentru unele specii capacitatea de a subțire serul pliat și gelatinei este o caracteristică distinctivă importantă. Cu excepții rare, oksidazopolozhitelnye NSE. care indică prezența lor în lanțul de transport de electroni al citocromului c; oksidazonegativnye microorganisme (Acinetobacter spp .. Chryseomonas spp. Flaviomonas spp .. S.maltophilia și unele tulpini B.cepacia) au doar citocromii a și b.
Structura antigenică a NSE a fost insuficient studiată și, practic, nu există informații fiabile privind relațiile antigenice dintre membrii diferitelor subgrupuri, metode, prin urmare, serologice de identificare care nu au fost utilizate în practică.
Semnificația clinică a
NSE este distribuit pe scară largă în natură. Principalele habitatele lor - apă, sol; Acestea pot fi izolate din alimente, de multe ori din lapte; multe specii sunt paraziți în corpul oamenilor sănătoși și animale pe piele, membranele mucoase ale tractului respirator superior, ale tractului urinar inferior, unii membri fac parte din flora indigenă a colonului. Frecventa izolarea lor din materialul clinic atinge 15% din bacteriile aerobe anaerobe si facultativi gram negative, din care aproximativ 70% au reprezentat P. aeruginosa. Acinetobacter spp. și S. maltophilia [32]. Cele mai multe dintre NSE sunt considerate ca agenți patogeni oportuniști, deoarece există numeroase observații privind participarea lor la procesul infectios. Există cazuri de focare epidemice de infectii nosocomiale. sursă exogenă de infecție este de multe ori echipamente de inhalare, instrumente chirurgicale, soluții pentru inhalare, catetere, tub de produse alimentare. Infectarea de multe ori apare la pacienții imunodeprimați: copii, vârstnici, persoane cu boli somatice severe, pacienții cu cancer și pacienții cu alcoolism cronic; dar de multe ori procesul infectios se dezvolta la tineri sănătoși. A fost o creștere a proporției de meningita si pneumonie cauzate de NSE. Pentru observații individuale cont NSE pentru aproape 20% din toate culturile pozitive în sânge [33]. Fiziopatologia procesul de infectare rolul principal este jucat de endotoxine, deși mecanismul de infectare nu sunt pe deplin înțelese.
Tabelul 1 Tabelul. 1 nu este inclus Gram nu fermentează glucoza fastidious genuri aerobic Brucella, Francisella, Legionella și microaerophiles genurile Campylobacter, Helicobacter. Clasificarea taxonomică NSE [1, în versiunile]
Notă. + - 90% sau mai mult din tulpini sunt pozitive; - - 90% sau mai negativ tulpini; +/- - 50-89% din tulpini sunt pozitive;
-/ + - 11-49% din tulpini sunt pozitive; w - reacție slab pozitivă; N / d - necunoscut; S - sensibile; R - rezistent.
Principii generale de identificare
Diagrama rațională de învățare practică de rutină în NSE includ [32]:
• Folosirea mediilor de uz general (agar cu sânge) și media-diagnostic diferențial (MacConkey, agar poliuglevodny Kligler sau Olkenitskogo) pentru NSE izolare primară și diferențierea lor de glucoza provizorie fermentează bacteriile Gram-negative.
• Studiul morfologiei celulelor pe colorația Gram.
• Screening-ul semnelor cardinale ale culturilor destinate - produse de pigment, prezența mobilității, activitatea citocromoxidază saccarolitic mediul enzimatic redox (RP) Hugh Leyfsona cu glucoza.
• Utilizarea teste suplimentare pentru identificarea NSE - formarea de indol, reducerea nitrat, hidroliza ureei, esculina, gelatina de lichefiere, decarboxilarea de aminoacizi, coloranți flageli și colab.
Creștere pe agar Kligler permite să se diferențieze de glucoză NSE fermentează bacteriilor Gram-negative (Tabel. 2).
Fermentarea glucozei prin acțiunea acidului format în indicatorul își schimbă culoarea teșită porțiune de mediu agar și coloană, dar apoi deplasarea pH-ului la partea alcalină sub influența aminelor formate prin decarboxilarea peptidelor în prezența oxigenului (de preferință în apropierea teșitura; S. typhimurium ATCC 14028 și Shigella flexneri ATCC 12022). Atunci când un număr mare de acizi (E. coli ATCC 25922), fermentarea simultană a glucozei și lactoză (zaharoză), este o „acidulare“ mediu întreg constant. In oxidarea NSE glucozei (în principal, pe suprafața conică a mediului) format într-o cantitate mică de acid este neutralizat cu alcalii produsele digerate peptone, astfel încât culoarea mediului sau rămâne neschimbat, există o slabă sau alcalinizarea acestuia (P. aeruginosa ATCC 21853). Lipsa de schimbări vizuale în caracteristica de mediu a NSE saccarolitic inert.
Folosirea RP-mediu utilizat de obicei mediu comercial independent sau preparate conform următoarei rețete: peptonă 2 g; D-glucoză 10 g; agar 2,5 g; bromtimol albastru (indicator) 0,03 g; NaCl 5 g; fosfat dibazic de potasiu (K2HPO4) 0,3 g; 1000 ml apă distilată. PH-ul final 7.1 (mediu verde). În cazul în care bacteriile nu se pot dezvolta pe RP-mediu pentru fiecare tub cu un carbohidrat este adăugat 2% ser bovin sau 1% hidrolizat de drojdie pentru a promova creșterea. în care, în contrast cu raportul standard de peptonă media și carbohidraților este de 1: 5 (în loc de 1: 1 sau 5: 1) facilitează diferențierea NSE. Cu un astfel de raport componentelor produse în scindarea amoniacului peptona un efect redus asupra modificării pH-ului mediului, și adăugând 0,3% agar retardati difuzia produselor acide prin clivarea de carbohidrați și contribuie la concentrațiile lor în timpul creșterii populației microbiene, care este înregistrată de un indicator de pH.
Cursul de studiu:
• Pentru fiecare cultură de testare utilizează întotdeauna două tuburi cu RP-mediu.
• Cultura coloniilor izolate pe mediu solid luate ac semănat și inoculat prin puncție RP-mediu de 1-2 ori o adâncime de jumătate agar coloană.
• Conținutul unuia dintre tuburi (cu glucoză) este umplut cu un ulei mineral steril sau un strat de parafină lichidă de 1 cm.
• Se incubează tuburile la ambele 35 ° C și monitorizată zilnic creșterea timp de 72 ore (pentru o creștere lentă NSE poate necesita o incubație mai lungă).
• formarea de acid în ambele tuburi prezintă digestia anaerobă a modului de carbohidrați (de fermentare), prezența acidului numai într-un tub de testare deschis indică degradarea aerobă (oxidare); culoare medie nu este schimbat, în cazul în care bacteriile nu prezintă activitate de oxidare (tabelul 3)..
Pentru a determina mobilitatea izolate clinice ac prick inoculată în tuburi cu compoziție medie cu 0,3% agar: 10 g kaziton; extract de drojdie 3 g; NaCl 0,5 g; 3 g de agar-agar; Distilați ml 1000 de apă; pH 7,2. Culturile sunt incubate la temperatura de 18-20 ° C (temperatura optimă pentru sinteza proteinelor din NSE flageli). Au fost citite la 6-8 ore după inoculare, și apoi din nou la 24 și 48 de ore.
Pentru speciile de identificare NSE utilizate frecvent panou comercial biochimice (20NE API, OxiFerm-Tube, Minitek și colab.), Sau sistem automat cu software furnizarea rezultatelor evaluării.
Pentru scopuri practice, determină, de asemenea, spectrul de compuși organici utilizați în celulă ca sursă de carbon și energie. adăugarea lor în mediu mineral ce conține o sursă de azot, face posibilă diferențierea speciilor individuale de capacitatea de a utiliza NSE citrat, acetat, oleatul, butirat, caproat, etanolul, și alte substraturi.