Escherichia coli - cea mai numeroasă și permanentă locuitor al intestinului gros cardului uman și toate animalele cu sânge cald. Este eliberat în mediu cu fecale, este, prin urmare, utilizat ca indicator al contaminării fecale a mediului și indirect prezența afișajului Tel în apă a agenților patogeni - agenți ai infecțiilor intestinale la om, sunt excretate în fecale, în a face alte obiecte.
Astfel, E. coli servește ca un microorganism sanitar-demonstrativ de apă. Din moment ce nu formează spori și mor la o metode relativ blânde de dezinfectare-Bani, prezența sa în produsele alimentare conservate sau apă indică o încălcare a regimului de conservare și sub suficiență tratării apei, ca și în cazul în E. coli păstrat viabilitatea înseamnă a supraviețui și alții nesporogen bacterii, cum ar fi Shigella dizenteria, Salmonella tifoidă și alte bacterii patogene - patogeni boli gastro-intestinale.
Indicele coli (indicele E. coli) este numărul de tije kilobice detectate și 1 litru de apă în studiu (conform standardelor internaționale, 100 ml).
Conform reglementărilor în vigoare titrului coli de apă potabilă nu trebuie să fie mai mică de 333 ml (Moscova - nu mai puțin de 500 ml), și indicele de coli - nu mai mult de 3 (a se vedea 15.1.4 ..).
Titrul de coli se determină prin metodele de testare a fermentației. Aceste metode se bazează pe capacitatea animalelor cu sânge cald din E. coli și a oamenilor de a se dezvolta la eliberarea gazului la temperaturi ridicate (43-44 ° C) și zaharuri fermentate (manitol, gluco-zu etc.). Există metode de fermentare cu două și trei etape.
Metoda de fermentare în trei etape constă în următoarele. În prima etapă fiind primul eșantion de fermentare: diluții diferite de lichid de testare folosind steril pipete-TION este introdus în balon și tuburile cu medii lichide speciale de colț de levodnymi (Bulira Mediul Eijkman mediu rozolovaya et al.) Și plutește.
În funcție de contaminarea microbiană preconizată a sursei de apă, se folosesc diferite scheme de însămânțare. Astfel, în culturile fac volum total de 300 ml (2 volume de 100 ml și 10 ml volume de 10), cu studiul apei de la robinet. In investigarea rezervoare deschise de apă (.. River, lac și așa mai departe) non-necesitatea de a răspândi apă într-un volum total de 111,1 ml (1 volum - 100 ml, 1 volum de - 10 ml, și un volum de 1 ml și 0,1 ml). Raportul dintre mediul și apa să fie semănate 1. 2. Prin urmare, cantități mici de culturi de apă (1 ml, 0,1 ml) a fost realizată în eprubete cu mediu diluat (concentrația normală) și volume mari de apă (100 ml și 10 ml) - în mediu concentrat.
Culturi cultivate într-un incubator la 43-44 ° C Techa-set de 24 h. La această temperatură creșterea microorganismelor este suprimata fara sanitar indicativ de apă ZNA-cheniya. Apoi, culturile sunt examinate pentru semne de creștere a E. coli (prezența bulelor de gaz în flotoare, decolorare, turbiditate).
La etapa a doua pentru a valida detectarea creșterii E. coli în mediu lichid din Insulele insamantate cu semne de creștere bacteriană utilizând loop-out în cazul însămânțare cutii Petri cu Endo Agar și cultivate cul-tur la 37 ° C timp de 24 ore.
Mediul endo constă în MPA, lactoză și un indicator decolorat (fuchsina este decolorată cu sulfit de sodiu). Pe acest mediu coliforme homeoterme formă Ms-votnyh roșu închis tipic, colonii roșii sau luminoase de culoare roz, cu centrul mai inchisa, avand un luciu metalic sau fără ea. O astfel de creștere caracteristică în mediul Endomo a acestor bacterii se datorează faptului că acestea fermentează în mod activ lactoză, produsele de clivare care determină reducerea dictatorului coloniei de colorare cu fucsin. Dacă nu există o creștere caracteristică pe fiecare probă, este dat un răspuns negativ.
În prezența unor colonii tipice din ele, se fac frotiuri care sunt colorate de Gram și microscopie. Dacă în frotiuri se găsesc tije gram negative negative care nu formează spori, aceștia trec la a treia etapă pentru confirmarea finală a rezultatelor studiului.
În cea de-a treia etapă, din coloniile tipice în care se găsesc celule micro-biologice caracteristice în timpul microscopiei, ele sunt transformate într-un mediu lichid diluat de carbohidrat (Bulir, Eikman, etc.). Culturile sunt cultivate la 43-44 ° C timp de 24 de ore, după care sunt luate în considerare în cele din urmă. În prezența turbidității în culturi, formarea de gaze și schimbările de culoare dau un răspuns pozitiv, ale cărui rezultate sunt exprimate ca o colită. În absența formării gazului, se dă un răspuns negativ, adică se confirmă datele primei probe de fermentație.
Indicele coli este determinat prin metoda filtrelor cu membrană. În acest scop, se utilizează filtre cu membrană nr. 3 (ultrafiltre), care sunt filme poroase fabricate dintr-un jgheab microcelular (nitroceluloză) cu un diametru al porilor de 0,7 μm. Înainte de filtrare, se sterilizează prin fierbere dublă în apă distilată timp de 15-20 minute. Apoi, penseta sterilă a filtrelor va împiedica suprafața prelaminată a dispozitivului de filtrare Seitz. Prin filtrul Seitz, o anumită cantitate de apă este filtrată sub vid (printr-un filtru cu membrană, nu mai mult de 100 ml de apă).
La sfârșitul filtrării, placa de filtrare este eliberată, explorând parțial instrumentul. Folosind o pensetă sterilă, filtrați sedimentul pe suprafața mediului Endo umplut într-un vas Petri, apăsând ferm pe mediu. Într-o ceașcă, puteți pune 4-5 filtre. După cultivarea într-un termostat la 37 ° C timp de 18-24 ore, se numără coloniile crescute pe filtru, caracteristice grupului Escherichia coli. Din 2-3 colonii, de obicei colorate și incolore, iau un material pentru frotiuri, le pata pe Gram și microscopia cu lentile de imersie.
În cazul în care sunt prezente în frotiurile mici nesporogeni colonii gram coli din restul însămânțări în flacoane cu un volum mic de mediu apos lichid cărbune-latre de (mediu sau Bulira al.). Culturi cultivate la 43-44 ° C timp de 24 h Disponibilitate gazarea. - figura târzie prezența bacteriilor coliforme.