istoricul primire
Prepararea ADN-ului recombinant in vitro și clonarea genelor a fost realizat pentru prima data in 1972 de catre oamenii de știință americani Boyer și Cohen.
ADN-ul cromozomal al bacteriei E. coli și plasmida aceasta ele sunt supuse unor tuburi speciale de enzime de restricție a enzimei Eco RI (Eco-er-one) care formează „lipicios“ se termină. Datorită faptului că în plasmida circulară conține numai o secvență de nucleotide specifică care recunoaște și taie enzima de restricție enzimatică Eco RI, enzima taie dublu ADN-ul plasmidic toron numai într-un singur loc și poartă o plasmidă circulară într-o stare deschisă cu „lipicios“ se termină. O moleculă de ADN a cromozomului este divizat în cât mai multe segmente deoarece conține secvențe de nucleotide specifice care pot fi recunoscute de către enzima de restricție enzimatică Eco RI. segmente de ADN în câmp electric puternic, instalarea electroforetic mai mare separate și segmente izolate sunt vopsite cu o vopsea speciala. Acest lucru produce vizibile cu ochiul liber setează o valoare segmente ADN. Segmentul de ADN poate fi separat de gel electroforetic de orice magnitudine prin dizolvare în apă. In acest fel, Cohen și Boyer amestecat in vitro izolat segment ADN al unui cromozom cu capete „lipicios“ și ADN-ul plasmidic, care este în stare deschisă, și aceste segmente diferite legate folosind enzima ADN ligază pentru a forma o legătură covalentă. Ca rezultat al plasmidelor a fost introdus segmentul de ADN a unui cromozom. Astfel, pentru prima dată, a creat o plasmidă recombinantă (Fig. 10).
clonarea genei
Structura moleculara a acestei plasmide poartă vectorul funcției ADN (ghid) ca plasmide pot recombina în ADN-ul cromozomial. Acest construct vector datorită prezenței în el a genei de rezistență la antibiotice a fost introdusă în besplazmidnuyu, t. E. O celulă bacteriană antibiotic instabil. Bacteriile cu plasmide recombinante, datorită faptului că au o genă de rezistență la antibiotice, spre deosebire de bacterii besplazmidnyh nu sunt uciși în mediu. conținând antibiotic. Prin urmare, în tubul de testare este introdus și eliberat antibiotic bacterie recombinantă clonă care este apoi cultivat. Fiecare bacterie clona componentă activă va conține segmentul de ADN străin (heterolog), iar acest segment se pot prolifera reproducerea biomasei bacteriene. Mai mult decât atât, în cazul în care plasmida recombinantă este capabilă de replicare autonomă, segmentul de ADN străin poate multiplica mai mult de zece ori. Reproducerea de ADN străine vector de clonare construct numite gene. Ca virale molecule vector și ADN fagic pot fi utilizate pentru donarea segmentelor de ADN sau gene rătăcitor.